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ELISA實驗方法之競爭法檢測抗原及...


發布日期:[2019-06-27] 共閱[135]次

    上次給大家介紹的雙抗體夾心法不知道大家還有印象嗎?如果已經忘記了,哈哈沒有關系,可以翻閱下我們的上一篇文章哦,今天給大家介紹的是另外的兩種方法哦,請看!

    競爭法檢測抗原

    當小分子抗原或半抗原因缺乏可作夾心法的兩個以上的抗體結合位點,因此不能用雙抗體夾心法進行測定,可以采用競爭法模式。經洗滌后分成兩組:一組加酶標記抗原和被測抗原的混合液,而另一組只加酶標記抗原,再經孵育洗滌后加底物顯色,這兩組底物降解量之差,即為所要測定的未知抗原的量。小分子激素、藥物等ELISA測定多用此法。

    競爭法的簡要操作步驟:

    1)先加入抗體,使抗體固定結合于載體表面;

    2)加入梯度濃度比例的待測樣品與酶標抗原混合物,同時做只加酶標抗原的對照組;

    3)加入酶促反應底物,發生顯色反應,對比實驗組及對照組的顯色差異,計算未知抗原的量。

    雙抗原夾心法檢測抗體

    雙抗原夾心法的反應模式與雙抗體夾心法類似。用特異性抗原進行包被和制備酶結合物,以檢測相應的抗體。與間接法測抗體的不同之處為以酶標抗原代替酶標抗抗體。此法中受檢標本不需稀釋,可直接用于測定,因此其敏感度相對高于間接法。乙肝標志物中抗HBs的檢測常采用本法。本法關鍵在于酶標抗原的制備,應根據抗原結構的不同,尋找合適的標記方法。

    雙抗原夾心法的簡要操作步驟為:

    1)先加入抗原,使抗體固定結合于載體表面;

    2)再加樣品,使目標檢測抗體形成抗原-抗體復合物;

    3)加酶標抗原;

    4)加入酶促反應底物,發生顯色反應,顯色的深淺與待測抗體的量成正比。

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