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ELISA實驗方法之雙抗體夾心法


發布日期:[2019-06-25] 共閱[49]次

    雙抗體夾心法是檢測抗原zui常用的方法,但要注意的是在一步法(待測抗原與酶標抗體一起加入反應)測定中,當標本中受檢抗原的含量很高時,過量抗原分別和固相抗體及酶標抗體結合,而不再形成“夾心復合物”出現鉤狀效應,甚至可不顯色而出現假陰性結果。因此在使用一步法試劑測定標本中含量可異常增高的物質(例如血清中HBsAg、AFP和尿液hCG等)時,應注意可測范圍的zui高值。用高親和力的單克隆抗體制備此類試劑可削弱鉤狀效應。

    雙抗體夾心法測抗原的另一注意點是類風濕因子(RF)的干擾。RF是一種自身抗體,多為IgM型,能和多種動物IgG的Fc段結合。用作雙抗體夾心法檢測的血清標本中如含有RF,它可充當抗原成份,同時與固相抗體和酶標抗體結合,表現出假陽性反應。

    雙抗體夾心法適用于測定二價或二價以上的大分子抗原,但不適用于測定半抗原及小分子單價抗原,因其不能形成兩位點夾心。

    雙抗體夾心法的簡要操作步驟為:

    1)先加入抗體,使抗體固定結合于載體表面;

    2)再加樣品,使目標檢測抗原形成抗原-抗體復合物;

    3)加酶標抗抗體(第二種動物抗抗原的酶標抗體);

    4)加入酶促反應底物,發生顯色反應,顯色的深淺與待測抗原的量成正比。

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